01流動(dòng)相走空

泵工作時(shí)要留意溶劑瓶?jī)?nèi)的流動(dòng)相是否被用完，若發(fā)生空泵運(yùn)轉(zhuǎn)會(huì)磨損柱塞、缸體或密封環(huán)，最終產(chǎn)生漏液。

02沒(méi)有流動(dòng)相流出，又無(wú)壓力指示

1、一種原因是泵內(nèi)有大量氣體，打開(kāi)泄壓閥，使泵在較大流量（如5ml/min）下運(yùn)轉(zhuǎn)，將氣泡排盡。

2.另一個(gè)可能原因是密封環(huán)磨損，需要更換。

03梯度洗脫的流動(dòng)相選擇不當(dāng)

1.要注意溶劑的互溶性，不相混溶的溶劑不能用作梯度洗脫的流動(dòng)相。另外有些溶劑在一定比例內(nèi)混溶，超出范圍后就不互溶，使用時(shí)更要引起注意。 

2.當(dāng)有機(jī)溶劑和緩沖液混合時(shí)，還可能析出鹽的晶體，尤其使用磷酸鹽時(shí)需特別小心。

04忽略空白梯度洗脫

1.梯度洗脫所用的溶劑純度要求更高，以保證良好的重現(xiàn)性。進(jìn)行樣品分析前必須進(jìn)行空白梯度洗脫，以辨認(rèn)溶劑雜質(zhì)峰。

2.因?yàn)槿跞軇┲械碾s質(zhì)富集在色譜柱頭后會(huì)被強(qiáng)溶劑洗脫下來(lái)。用于梯度洗脫的溶劑需徹底脫氣，以防止混合時(shí)產(chǎn)生氣泡。

05流動(dòng)相不過(guò)濾

1.由于任何雜質(zhì)微粒都會(huì)磨損柱塞、密封環(huán)、缸體和單向閥，因此應(yīng)預(yù)先除去流動(dòng)相中的雜質(zhì)微粒。

2.流動(dòng)相最好在玻璃容器內(nèi)蒸餾，而常用的方法是過(guò)濾，可通過(guò)4.5um濾膜過(guò)濾后使用，現(xiàn)配現(xiàn)用。輸液泵的濾器應(yīng)經(jīng)常清洗或更換。

06使用后不及時(shí)清洗泵？

1.如果將含緩沖液的流動(dòng)相留在泵內(nèi)，尤其是在停泵過(guò)夜或更長(zhǎng)時(shí)間的情況下，或由于蒸發(fā)、泄漏，甚至只是由于溶液的靜置，就可能析出鹽的微細(xì)晶體，這些晶體將和上述固體微粒一樣會(huì)損壞密封環(huán)和柱塞等。 

2.因此，必須用純水將泵充分清洗后，再換成適合于色譜柱保存或有利于泵維護(hù)的溶劑（對(duì)于反相鍵合硅膠固定相，可以是甲醇或甲醇-水）。

07壓力過(guò)高或過(guò)低

壓力降低的原因則可能是管路有泄漏或堵塞。檢查堵塞或泄漏時(shí)應(yīng)逐段進(jìn)行。

在進(jìn)行梯度洗脫時(shí)，由于多種溶劑混合，而且組成不斷變化，因此帶來(lái)一些特殊問(wèn)題，必須充分重視。

08調(diào)節(jié)流速太快

調(diào)節(jié)流速時(shí)應(yīng)該緩慢進(jìn)行，在進(jìn)樣時(shí)閥的轉(zhuǎn)動(dòng)不能過(guò)快，避免導(dǎo)致壓力和溫度的急劇變化及任何機(jī)械震動(dòng)影響柱內(nèi)填料的填充狀況。

09反沖色譜柱

一般說(shuō)來(lái)色譜柱不能反沖，除非特別指明該柱可以反沖時(shí)，才可以反沖除去留在柱頭的雜質(zhì)。否則反沖會(huì)迅速降低柱效，嚴(yán)重的甚至損壞色譜柱。

010不使用保護(hù)柱

為了避免將來(lái)源于色譜系統(tǒng)的污染或樣品的污染直接進(jìn)入柱內(nèi)，從而縮短色譜柱的使用壽命，需要在進(jìn)樣器和色譜柱之間連接保護(hù)柱從而截取不溶性顆粒和吸附樣品基質(zhì)中的雜質(zhì)。使用保護(hù)柱可大大降低分析柱受污染的程度，延長(zhǎng)分析柱使用壽命。