一、無菌操作技術

1、定義　

是指在執(zhí)行實驗過程中，防止一切微生物侵入機體和保持無菌物品及無菌區(qū)域不被污染的操作技術和管理方法；

無菌操作技術是微生物實驗的基本技術，是保證微生物實驗準確和順利完成的重要環(huán)節(jié)。

2、內容

無菌操作技術主要包括兩方面：

1）創(chuàng)造無菌的培養(yǎng)環(huán)境。包括提供密閉的培養(yǎng)容器、培養(yǎng)容器的滅菌、培養(yǎng)基的滅菌等；

2）在操作和培養(yǎng)過程中防止一切其它微生物的侵入的措施。包括紫外線殺菌、甲醛熏蒸、超凈臺的消毒與檢測、操作工具、器皿滅菌、操作方法等。

3、無菌操作原則

1）在執(zhí)行無菌操作時，必須明確物品的無菌區(qū)和非無菌區(qū)，接種時必須穿工作服、戴工作帽應在進無菌室前用肥皂洗手，然后用75%酒精棉球將手擦干凈；

2）在操作前20～30分鐘要先啟動超凈臺和紫外燈，進行接種所用的吸管、平皿及培養(yǎng)基等必須經消毒滅菌，打開包裝未使用完的器皿，不能放置后再使用，金屬用具應高壓滅菌或用95%酒精點燃燒灼3次后使用。嚴禁用手直接拿無菌物品，如瓶塞等，而必須用消毒的鉗、鑷子等；

3）從包裝中取出吸管時，吸管尖部不能觸及外露部位，使用吸管接種于試管或平皿時，吸管尖不能觸及試管或平皿邊；

4）接種樣品、轉種細菌必須在酒精燈前操作，接種細菌或樣品時，吸管從包裝中取出后及打開試管塞都要通過火焰消毒；

5）接種環(huán)或接種針在接種細菌前應經火焰燒灼全部金屬絲，必須時還要燒到環(huán)和針與桿的連接處；

6）吸管吸取菌液或樣品時，應用相應的橡皮頭吸取，不得直接用口吸。傾倒平板應在超凈臺內操作，并且在開啟和加蓋瓶塞時需反復用酒精燈燒。