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MPN法作為實(shí)驗(yàn)室微生物定量檢測(cè)常用有效的方法之一，但是很多檢測(cè)人員對(duì)MPN法的理解太膚淺、不充分，導(dǎo)致在使用MPN法的時(shí)候存在很多錯(cuò)誤的認(rèn)識(shí)，有時(shí)還容易導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果錯(cuò)誤。針對(duì)這些問題，今天我們就一起來聊聊“MPN法的原理、應(yīng)用過程中注意事項(xiàng)”！
還記得剛畢業(yè)后，我就來到一個(gè)做大豆制品的公司，入職成了一名光榮的微生物化驗(yàn)員，在工作的第一天，化驗(yàn)室的師父就給我簡(jiǎn)單介紹了每天的大致工作任務(wù)。
在工作的第二天，我就很納悶“菌落是怎么形成的、什么是MPN？”，于是我就鼓足勇氣說：“師父，我有個(gè)問題想問你，什么是MPN”
師父回答：“最大可能數(shù)”，眼皮都沒有抬一下。
我想了想，又膽怯的問：“那啥是最大可能數(shù)？”
師父提高了嗓門，回答：“是一種用統(tǒng)計(jì)學(xué)算出來的樣品中最可能的數(shù)！”
我又想了想，又問：“這個(gè)數(shù)有什么意義？它是怎么算的？”
師父猛地抬起頭，眉頭緊鎖地回了一句：“今天的培養(yǎng)皿都洗了么？三角瓶呢？培養(yǎng)基滅了沒？夠用嗎？......”
我聽聞，溜溜的去干活去了，但是還是沒弄明白。后來就聽見師父自言自語(yǔ)說，誰能告訴我啊，什么是MPN，我也有點(diǎn)蒙......”
要想說清楚MPN，首先要了解MPN法的概念。
MPN（most probable number）法：即最近似數(shù)法，也稱為最大可能數(shù)法，是食品檢驗(yàn)中常用的方法。1915年，McCrady首次發(fā)表了用MPN法 (最大可能數(shù)法) 來估算細(xì)菌濃度的方法， 這是一種應(yīng)用概率理論來估算細(xì)菌濃度的方法。
•MPN法是統(tǒng)計(jì)學(xué)和微生物學(xué)結(jié)合的一種定量檢測(cè)法。待測(cè)樣品經(jīng)系列稀釋并培養(yǎng)后,根據(jù)其未生長(zhǎng)的最低稀釋度與生長(zhǎng)的最高稀釋度,應(yīng)用統(tǒng)計(jì)學(xué)概率論推算出待測(cè)樣品中大腸菌群的最大可能數(shù)。
•MPN值并不能表示實(shí)際菌落數(shù)， 實(shí)際菌落數(shù)有可能落在置信區(qū)間內(nèi)的任何一點(diǎn)，MPN值是落在這個(gè)置信區(qū)間內(nèi)概率最大的一點(diǎn)。
MPN法：適用于具有特殊生理功能的微生物類群或者未經(jīng)處理的含少量菌的食品。
•MPN法適用性廣，與很多種類的食品的微生物限量要求方法一致，是常用有效的方法；
•靈敏度較高，適用于污染菌落較少的樣品；
•測(cè)定MPN值時(shí)，要考慮陽(yáng)性管數(shù)；
相同的MPN值，代表的實(shí)際菌落數(shù)范圍卻有很大的差別。假如你的產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)為10MPN/ g，實(shí)測(cè)值為9.4MPN/g（陽(yáng)性管數(shù)“0-3-0”），那么很難判定你的產(chǎn)品是否合格。
•MPN值非連續(xù)；
•MPN值的準(zhǔn)確度隨Pmax的減小而減小。
現(xiàn)在，明白了么？MPN值就是在現(xiàn)有因素下能推算出的微生物含量概率最大的那個(gè)濃度。接下來我們以大腸菌群檢測(cè)為例一下其應(yīng)用的注意事項(xiàng)和要點(diǎn)！
1.MPN法注意事項(xiàng)：
•全過程不得超過15min。原因是大腸菌群在適宜條件下繁殖很快，15min就可以繁殖一代。
•樣品勻液的pH值應(yīng)在6.5～7.5之間。
•接種量是MPN法成功與否的關(guān)鍵，一方面接種量要適當(dāng)以便于出現(xiàn)全陽(yáng)性和全陰性的稀釋度，另一方面接種量必須準(zhǔn)確。MPN表和MPN計(jì)算公式都是和接種量密切相關(guān)的。而培養(yǎng)基的體積是多少并不重要，只要接種后培養(yǎng)基濃度接近正常濃度(單倍濃度)就可以了。通常接種稀釋液的體積是1 mL,這個(gè)體積必須準(zhǔn)確，而培養(yǎng)基的量是10mL還是9mL影響不大。
•以48h±2h為最終觀察結(jié)果時(shí)限。大腸菌群結(jié)果也以此時(shí)為最終結(jié)果，但是原始記錄要體現(xiàn)24小時(shí)的培養(yǎng)結(jié)果記錄。
•MPN值是基于統(tǒng)計(jì)的估計(jì)結(jié)果， MPN值是可能性最大的一個(gè)估計(jì)值，其95%置信區(qū)間有95%的可能包括真實(shí)結(jié)果。結(jié)果報(bào)告的MPN值要結(jié)合95%置信限來理解， MPN結(jié)果實(shí)際上是一個(gè)結(jié)果分布。
給一個(gè)例子來理解MPN結(jié)果吧！
【例】 GB 4789.3-2016 中表B. 1接種量0. 1 g、0.01 g和0.001 g對(duì)應(yīng)的陽(yáng)性管數(shù)2、 2、0。產(chǎn)品限量是“<20 MPN/g"。此產(chǎn)品合不合格?
查表得MPN值為“21MPN/g",其上、下95%置信限分別
為“4.5MPN/g"和“42MPN/g"。即每克樣品中21個(gè)大腸菌群，有95%的可能結(jié)果分布在每克4.5(下限)個(gè)至42個(gè)(上限)之間。換句話說，接種量0.1g、0.01 g和 0.001 g對(duì)應(yīng)的陽(yáng)性管數(shù)2、2、0的100次檢測(cè)中，有95個(gè)結(jié)果在每克4.5個(gè)至42個(gè)之間，其中每克21個(gè)的結(jié)果次數(shù)最多。
2.MPN檢索表的應(yīng)用
•MPN（最可能數(shù)most probable number）是表示樣品中活菌密度的估測(cè)。因此MPN值只是活菌密度的估算值，并不是樣品中活菌數(shù)的真值。
3.使用MPN檢索表的注意點(diǎn)
•這個(gè)MPN檢索表是ISO、FDA、AOAC、USDA/FSIS、北歐等標(biāo)準(zhǔn)通用的。
•表里的數(shù)字是有小數(shù)點(diǎn)的。
•當(dāng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果在MPN表中無法查找到MPN值時(shí)，如：陽(yáng)性管數(shù)為122，123，232，233等時(shí)，建議增加稀釋度（可做4~5個(gè)稀釋度），使樣品最高稀釋度能達(dá)到陰性終點(diǎn)(如果污染程度不能判定，則多加一稀釋度），然后再遵循相關(guān)的規(guī)則進(jìn)行查找，最終確定MPN值。
